VIÊN NÉN CHYMOTRYPSIN

Tabellae Chymotrypsini

 

Là viên nén chứa chymotrypsin.

Chế phẩm phải đáp ứng các yêu cầu trong chuyên luận “Thuốc viên nén” (Phụ lục 1.20) và các yêu cầu sau đây:

 

Hàm lượng chymotrypsin, từ 90,0 đến 120,0% so với hoạt lực ghi trên nhãn.

 

Tính chất

Viên nén màu trắng.

 

Định tính

A. Lấy một lượng bột viên tương ứng với 4,2 mg chymotrypsin, hòa tan trong 4 ml nước đun sôi để nguội, lọc. Lấy 0,05 ml dịch lọc cho vào khay sứ trắng, thêm 0,2 ml dung dịch cơ chất. Màu đỏ tía xuất hiện trong vòng 3 phút.

Cách pha dung dịch cơ chất:

Dung dịch đỏ methyl - xanh methylen: Trộn đồng lượng dung dịch đỏ methyl 0,1% trong ethanol (TT) và dung dịch xanh methylen 0,05% trong ethanol (TT).

Dung dịch cơ chất: Cân chính xác 237,0 mg N-acetyl-L-tyrosin ethyl ester cho vào bình định mức 100 ml, thêm 2 ml ethanol (TT), lắc đến khi tan. Thêm 20 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,0 (chuẩn bị trong phần định lượng), thêm 10 ml dung dịch đỏ methyl - xanh methylen rồi pha loãng với nước vừa đủ.

B. Lấy một lượng bột viên tương ứng với 30 mg chymotrysin hòa tan trong dung dịch acid hydrocloric 0,001 N, pha loãng thành 100 ml với cùng một dung môi, lọc. Phổ hấp thụ tử ngoại ( Phụ lục 4,1) của dịch lọc thu được trong khoảng bước sóng từ 220 đến 320 nm phải có cực đại ở bước sóng 281 nm và cực tiểu  ở 250 nm.

 

Định lượng

Dung dịch đệm phosphat pH 7,0: Hòa tan 4,54 g kali dihydrophosphat (TT) trong 500 ml nước (dung dịch A). Hòa tan 4,73 g dinatri hydrophosphat khan (TT) trong 500 ml nước (dung dịch B). Trộn 38,9 ml dung dịch A với 61,1 ml dung dịch B. Điều chỉnh tới pH 7,0 bằng cách thêm từng giọt dung dịch B nếu cần.

Dung dịch cơ chất: Hòa tan 23,7 mg N-acetyl-L-tyrosin ethyl ester (loại thích hợp để dùng định lượng chymotrypsin) trong khoảng 50 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,0 bằng cách làm ấm. Để nguội, thêm dung dịch đệm phosphat pH 7,0 vừa đủ 100 ml. Lưu ý: Có thể bảo quản đông lạnh dung dịch cơ chất và được sử dụng sau khi rã đông, nhưng phải làm đông lạnh ngay sau khi pha.

Dung dịch thử: Cân 20 viên và nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột viên thích hợp và hòa tan trong dung dịch acid hydrocloric 0,0012 N để thu được dung dịch có nồng độ từ 12 - 16 đơn vị chymotrypsin USP trong 1 ml. Dùng dung dịch có nồng độ thấp hơn hoặc cao hơn (nếu cần)   để trong quá trình định lượng sự thay đổi độ hấp thụ trong khoảng từ 0,008 – 0,012 trong mỗi 30 giây.

Cách tiến hành

Lưu ý: Xác định sự thích hợp của cơ chất và kiểm tra sự điều chỉnh máy quang phổ tử ngoại bằng cách tiến hành sử dụng chymotrypsin chuẩn thay thế  mẫu thử.

Định lượng bằng máy quang phổ tử ngọai thích hợp, có hệ thống điều nhiệt để duy trì nhiệt độ buồng chứa cốc đo ở 25 ± 0,1^oC. Xác định nhiệt độ trong cốc đo trước và sau khi đo độ hấp thụ để đảm bảo nhiệt độ không thay đổi quá 0,5 ^oC.

Hút chính xác 0,2 ml dung dịch acid hydrocloric 0,0012 N  và 3,0 ml dung dịch cơ chất vào cốc đo dày 1 cm. Đặt cốc đo vào máy quang phổ tử ngoại và điều chỉnh thiết bị để có độ hấp thụ là 0,200 ở 237 nm.

Hút chính xác 0,2 ml dung dịch thử cho vào cốc đo dày 1 cm, thêm chính xác 3,0 ml dung dịch cơ chất. Đặt cốc đo vào máy quang phổ tử ngoại  (Chú ý: Thực hiện thêm mẫu vào cốc đo đúng theo thứ tự này, và bắt đầu ghi thời gian phản ứng ngay sau khi thêm dung dịch cơ chất).

Đo độ hấp thụ sau mỗi 30 giây trong ít nhất 5 phút. Lặp lại thí nghiệm cùng độ pha loãng ít nhất một lần. Giá trị tuyệt đối của độ hấp thụ ít quan trọng bằng tốc độ suy giảm không đổi của độ hấp thụ. Nếu tốc độ suy giảm không đổi của độ hấp thụ này không đạt được trong khoảng thời gian ít hơn 3 phút, phải làm lại thí nghiệm, nếu cần sử dụng dung dịch thử có nồng độ thích hợp. Khi xác định lại lần thứ hai các dung dịch thử có cùng độ pha loãng phải có tốc độ suy giảm của độ hấp thụ như lần đầu.

Để xác định sự thay đổi độ hấp thụ trung bình trong mỗi phút, chỉ sử dụng các giá trị nằm trên đường biểu diễn sự suy giảm độ hấp thụ theo thời gian, đoạn có tốc độ suy giảm độ hấp thụ không đổi trong 3 phút.

Một đơn vị chymotrypsin USP là hoạt tính làm thay đổi độ hấp thụ là 0,0075 trong mỗi phút với các điều kiện quy định của phương pháp định lượng này.

Tính hàm lượng (%) chymotrypsin trong viên so với hàm lượng ghi trên nhãn theo công thức:

 

 

 

Trong đó:

A₁ : Độ hấp thu ở thời điểm đầu trong khoảng biến thiên độ hấp thu tuyến tính,

A₂ : Độ hấp thu ở thời điểm cuối trong khoảng biến thiên độ hấp thu tuyến tính,

T   : Khoảng thời gian giữa lần đọc đầu và lần đọc cuối (phút),

D  : độ pha loãng của dung dịch thử,

W : khối lượng bột viên mẫu thử (mg),

M : khối lượng trung bình viên (mg),

 

Bảo quản

Trong bao bì kín, để nơi khô mát, tránh ánh sáng.

 

Loại thuốc

Thuốc men phân giải protein.

 

Hàm lượng thường dùng

4,2 mg (tương ứng 21 microkatals hay 4200 đơn vị chymotrypsin USP).